凍存細(xì)胞需要程序降溫儀

 程序冷凍儀是一種溫變速率可調(diào)的程序控制冷凍系統(tǒng)，廣泛應(yīng)用于輕工、農(nóng)、醫(yī)、基礎(chǔ)生物研究等各個(gè)領(lǐng)域中，用于淋巴細(xì)胞、組織庫、骨髓細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞，動(dòng)、植物細(xì)胞、心肌細(xì)胞等的凍存。如何用好程序降溫儀，讓珍貴的免疫細(xì)胞，干細(xì)胞安全降溫，保持活性？

低溫生物學(xué)，生物體內(nèi)水的形態(tài)變化：

在0℃到零下60 ℃溫度范圍內(nèi)，細(xì)胞內(nèi)生命活動(dòng)較活躍，且六角形冰晶會(huì)嚴(yán)重?fù)p傷細(xì)胞膜、細(xì)胞器。

在零下80 ℃到零下100 ℃溫度范圍內(nèi)，細(xì)胞內(nèi)生命活動(dòng)顯著降低，細(xì)胞內(nèi)會(huì)形成方形的冰塊，對(duì)細(xì)胞膜、細(xì)胞器損傷減弱。

在零下130 ℃為水的玻璃化溫度，在此溫度以下，細(xì)胞內(nèi)水結(jié)為不定形冰，幾乎不傷害組織細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，且細(xì)胞內(nèi)生命活動(dòng)幾乎*停止。

細(xì)胞降溫過程中，降溫速率過快/過慢都會(huì)對(duì)細(xì)胞造成損傷以致影響復(fù)蘇活性，降溫過快-細(xì)胞內(nèi)水迅速結(jié)晶，對(duì)細(xì)胞造成冰晶傷害；降溫過慢-細(xì)胞壁內(nèi)外產(chǎn)生滲透壓，造成細(xì)胞脫水。降溫的不同階段，采用不同的降溫速率，可有效減少細(xì)胞損傷，提高復(fù)蘇率。

活細(xì)胞降溫方法

1、“經(jīng)典"次序降溫: +4°C > -20°C十-80C >長期

2、直接放入液氮

3、玻璃化降溫技術(shù)

以上三種方法，復(fù)蘇后成活率高，但是很難規(guī)模化；適用于大體積組胞

4、程序降溫儀:適用于原代細(xì)胞，對(duì)溫度變化高度敏感的細(xì)胞降溫

使用程序降溫儀的原因

提高樣品活性和復(fù)蘇率；

過程控制，消除批次實(shí)驗(yàn)中的變數(shù)；

樣品保存時(shí)間久>10年；

降溫曲線可記錄存檔。

目前市面上常用的程序降溫儀工作原理是，通過微處理器控制系統(tǒng)和電磁閥，控制噴入腔體中的液氮量來控制降溫速率。其優(yōu)點(diǎn)是：控溫，受外界環(huán)境影響小。尤其是處理大體積樣本時(shí)，快速噴入的大量液氮更易帶走樣本中的潛熱，從而快速降溫，保證更好的樣本復(fù)蘇活性。

程序降溫儀是通過控制噴入腔體中的液氮量來控制降溫速率。一般為先慢凍，后快凍。我們的程序降溫儀主要有六種程序內(nèi)容，包括2ml凍存管、96孔板、麥管、65-100ml造血干細(xì)胞(一)、65-100ml造血干細(xì)胞(二)、皮膚組織。這些內(nèi)容都是經(jīng)過很多相關(guān)方面的專家、教授一起通過實(shí)驗(yàn)研究得出的。

程序降溫儀的優(yōu)勢：

最新聚氨酯發(fā)泡技術(shù)，保溫性能好；

側(cè)開門設(shè)計(jì)，存取樣品更方便；

高精度PID控制算法，控溫更精確；

能夠提高樣品的活性和復(fù)蘇率；

通過上位機(jī)軟件，可以數(shù)據(jù)連接電腦顯示以及實(shí)時(shí)打印；

凍存過程實(shí)時(shí)記錄，井可追溯和打印

CX系列智能程序降溫儀是我公司開發(fā)研制成功的智能型冷凍儀。該儀器采用微機(jī)控制技術(shù)，專用軟件，能較準(zhǔn)確地控制液氮的施放量，從而保證被凍存的生物制品以適宜的冷凍速率降溫冷凍。該儀器具有操作簡便、人機(jī)界面清楚。

我國臨床低溫醫(yī)學(xué)工作發(fā)展迅速，促進(jìn)了移植醫(yī)學(xué)的發(fā)展，特別是在骨髓、造血干細(xì)胞、皮膚、角膜、內(nèi)分泌腺體、以及血管和瓣膜等的冷凍保存和移植應(yīng)用取得了顯著成績。成功的造血干細(xì)胞移植依賴于造血干細(xì)胞活力的保存。

生物樣品在降溫冷凍過程中，當(dāng)由液態(tài)向固態(tài)變化的相變期內(nèi)會(huì)釋放一定熱量，使其溫度回升，不控制降溫速率的冷凍過程將會(huì)導(dǎo)致組織細(xì)胞死亡。準(zhǔn)確地測定生物樣品的相變點(diǎn)，用微機(jī)編制降溫程序，以便在樣品相變時(shí)加大液氮輸入量，克服相變樣品溫度的回升，使細(xì)胞安全而迅速地度過相變期，這是提高被凍樣品成活率的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。